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Ensayos de Potencia para VacunasempleandoCultivos CelularesMSc.MARIA TERESA IBARZ M.Jefe División Control NacionalProductos Biológicos
Cultivos CelularesSe desarrolló a finales del siglo XIX como unacontinuación de las técnicas de EmbriologíaWilhem Roux mantuvo en el año 1885,células de embrión de pollo en solución salinadurante unos días
CULTIVOS CELULARESEl zoólogo Americano R.G. Harrison (1907) esconsiderado el iniciador de los cultivos de tejidosanimalesEstablecimiento de las primeras líneas celulares(HeLa y células-L de ratón)
CULTIVOS CELULARESRous y Jones, 1916 emplearon por vez primera veztripsina para disociar las células de embriones depollo, estableciendo el primer cultivo celular.Uno de los mayores problemas para elestablecimiento de los cultivos celulares es laaparición de múltiples contaminaciones
CULTIVOS CELULARESAplicaciones:- Diagnóstico- Virología y producción de vacunas virales- Investigación del cáncer- Producción de proteínas- Estudios de toxicidad- Producción tejidos, piel para transplantes- Aplicaciones industriales y agrícolas
VIROLOGÍACULTIVOS CELULARESVirus VIH
Producción VacunasViralesAnimal completoO Cultivo PrimarioFiebre AmarillaSarampión
Línea CelularProducciónVacunas ViralesSUSPENSION VIRAL
tivada/Fraccionada
CULTIVOS CELULARESDIAGNOSTICO
Cuantificación de virus1) Microscopía Electrónica
Cuantificación de virus2) Efecto sobre la célula hospedadora(Unidad vírica infectiva) Formación de placas de lisis Efecto Citopático Efecto no Visible: Hemaglutinación Inmunoflorescencia Tinción
Cuantificación deVirusPOTENCIA VACUNAVIRAL ATENUADA
LINEA CELULARSUCEPTIBLELIBRE DE AGENTESADVENTICIOSPOTENCIA VACUNAVIRAL ATENUADA
Determinación del Efecto CitopáticoDosis Infectiva Cultivo Celular 50(DICC50)
PRUEBAS EN CULTIVOSCELULARESVentajas Control del medio ambiente Homogeneidad. Morfología y Composiciónuniforme. Se pueden hacer réplicas idénticas,superando la heterogeneidad de animales deexperimentación.
CULTIVOS CELULARES Economía en el uso de reactivos o Vacunas aestudiar. Emplea volúmenes reducidos Motivaciones Eticas
CULTIVOS CELULARESDesventajas Técnica sensible Crecimiento células animales mucho máslento que los contaminantes más habituales(hongos, levaduras, bacterias, micoplasmas,.) Organimos pluricelulares requieren complejamezcla de nutrientes, que simula el plasma o elfluido intersticial.
CULTIVOS CELULARES Condiciones de asepsia en todomomento Instrumental y personal calificado parasu manipulación Cantidad y costo:1 g Cultivo Celular es 10 vecesmás costoso que el animal.
CULTIVOS CELULARES Inestabilidad.Dotación cromosómicaaneuploideDiferencias significativas entregeneracionesSe emplean por determinado número degeneraciones
CONTROL ESTADÍSTICO DE PROCESOSGRAFICAS DE CONTROLPatron Regional de Vacuna Antiamarilica. Lote: 003PATRÓNComportamientoVACUNA ANTIAMARILICAaño 2004Log 10DL50 / 0,5ml5,0Log 10DL50 / RIOR3,53,02,5012345678910 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30Nº Determinaciones
CONTROL ESTADÍSTICO DE PROCESOSGRAFICAS DE CONTROLPatrón Regional de Vacuna Antipoliomielitica Oral. Lote: SVI/OPV 001 III/96.Comportamiento "Polio Total" año 2004DICC50 /0,1 mLLSC 6,35LIC 5,15LC 5,756,86,4log 10 DICC50/ 0,1ml6,05,65,24,84,44,012345678910Nº Determinaciones11121314151617
Calificación de Analistas:Guías emitidas por la ConferenciaInternacional de Armonización (ICH)documentos Q2A5 y Q2B6
RESULTADOS CALIFICACION ANALISTASPRUEBA POTENCIA VAC. SARAMPION
CULTIVOS CELULARES El cultivo celular no puede reemplazarsiempre al ensayo 'in vivo'
DESAFÍO /RESPUESTAINMUNEPROTECCIÓN
RESUMEN PRUEBAS POTENCIA Y/O CUANTIFICACIÓN AgEN VACUNASPOTENCIAVACUNA ATENUADAVIRUSCULTIVOCELULARDICC50UFPVACUNA INACTIVADAANIMALESANIMALESDL50CUANTIFICACIONDEL ANTÍGENOELISADE50UIUNIDADES INTERNACIONALESOTROSmcgUIUNIDADES INTERNACIONALES
establecimiento de los cultivos celulares es la aparición de múltiples contaminaciones Rous y Jones, 1916 emplearon por vez primera vez . generaciones. Se emplean por determinado número de generaciones. CULTIVOS CELULARES. Patron Regional de Vacuna Antiamarilica. Lote: 003 Comportamiento año 2004 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0
