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Quito - EcuadorNORMA TÉCNICA ECUATORIANANTE INEN 1707:1990FECHA DE CONFIRMACIÓN: 2012-11-26ALIMENTOS ZOOTÉCNICOS. MELAZAS. DETERMINACIÓNDE LOS AZÚCARES TOTALES EXPRESADOS COMOREDUCTORESPrimera ediciónANIMAL FOODS. MOLASSES. DETERMINATION OF TOTAL SUGARS EXPRESSEDAS REDUCTORSFirst editionDESCRIPTORES: Alimentos zootécnicos, melazas, determinación, azucares totalesAL 06.01-308CDU: 664.118:545.23ICS: 67.060

CDU: 664.118 :545.23ICS: 67.060AL 06.01-308Norma TécnicaEcuatorianaObligatoriaALIMENTOS ZOOTÉCNICOS. MELAZASDETERMINACIÓN DE LOS AZÚCARES TOTALESEXPESADOS COMO REDUCTORESNTE INEN 17071990-021. OBJETO1.1 Esta norma establece el método de ensayo para la determinación de los azúcares totales, a travésde la determinación de sacarosa y los azúcares reductores en la melaza destinada a la alimentaciónanimal.2. RESUMEN2.1 El método es conocido como el método Lane y Eynon. Consiste en determinar el volumen de3disolución de azúcar que se necesita para reducir 10 ó 25 cm de disolución de Fehling, en presenciade azul de metileno como indicador interno. Los azúcares reductores obtenidos junto con ladeterminación de la inversión total se usan para el cálculo de la sacarosa.3. INSTRUMENTAL3.1 El equipo de laboratorio usual y, en particular:3.1.1 Balanza analítica3.1.2 Hornilla eléctrica3.1.3 Baño de María333.1.4 Matraz volumétrico de 200 cm y de 250 cm ,333.1.5 Pipetas graduadas de 10 cm , 20 cm y 50 cm3.1.6 Bureta de 50 cm333.1.7 Embudo de 100 mm de diámetro.33.1.8 Matraz Erlenmeyer de 500 cm y 1 000 cm33.1.9 Agitador de 150 mm x 5 mm3.1.10 Cronómetro3.1.11 Cápsula4. REACTIVOS4.1 Todos los reactivos deben ser reconocidos como de grado analítico. El agua usada debe seragua destilada o agua de pureza equivalente.4.1.1 Solución EDTA al 4%4.1.2 Solución Fehling A4.1.3 Solución Fehling B4.1.4 Solución de azul de metileno al 1%(Continúa)DESCRIPTORES: Alimentos zootécnicos, melazas, determinación, azucares totales.-1-1989-020

NTE INEN 17071990-024.1.5 Ácido clorhídrico (gravedad específica 1,103)4.1.6 Ácido clorhídrico (0,5 M)4.1.7 Solución de Fenolftaleína (1%)4.1.8 Solución de hidróxido de sodio (4 M)4.1.9 Solución estándar de azúcar invertido4.1.10 Piedra pómez4.1.11 Perlas de vidrio4.1.12 Parafina líquida4.2 Las soluciones se prepararán como lo indicado en Anexo B.5. METODO DE ENSAYO5.1 Preparación de la muestra35.1.1 Se pesan aproximadamente 4g de muestra en la cápsula y se disuelve con 50 cm de agua3destilada agitando con una varilla de vidrio. Se adicionan 16cm de EDTA al 4% y se transfiere la3mezcla cuantitativamente a un matraz volumétrico de 250 cm , llevando a volumen con aguadestilada.5.1.2 Cuando el material es muy viscoso, de manera que es difícil mezclar la muestra con aguadestilada a temperatura ambiente, se calienta previamente en un baño de María en frascocerrado, a 50 C por 6 horas antes del análisis.5.1.3 Los resultados más precisos se obtienen cuando la proporción de azúcares en la muestra3es aproximadamente 0,29gr por 100 cm de solución. Por tanto, si se presume que tienemayor proporción, la muestra debe diluirse.5.1.4 Si la muestra presenta una turbiedad apreciable por la presencia de calcio, se agrega 0,1 g de3oxalato de potasio por cada 100 cm y se filtra para eliminar el precipitado.5.2 Procedimiento5.2.1 Determinación de azúcares reductores.35.2.1.1 Tomar con la pipeta 100 cm de la muestra preparada en el numeral 5.1.1 y colocar en un3matraz volumétrico de 200 cm ; llevar a volumen con agua destilada y mezclar.5.2.1.2 Llenar la bureta con la solución preparada en el numeral 5.2.1.1335.2.1.3 Tomar con la pipeta 5 cm de solución Fehling A y 5 cm de solución Fehling B en unmatraz Erlenmeyer, añadir un poco de piedra pómez, tres perlas de vidrio y 5 gotas de parafina líquida(no indispensable).35.2.1.4 Desde la bureta adicionar 15 cm de la solución muestra a la solución de Fehling.5.2.1.5 Calentar la mezcla en la hornilla hasta alcanzar la ebullición, en un tiempo no mayor de2,25 minutos.5.2.1.6 Si después de que el líquido ha permanecido en ebullición durante 10 a 15 segundos, sucolor demuestra que la solución Fehling no ha sido reducida, se realizan otras adiciones,3añadiendo 5 cm , y dejando hervir unos pocos segundos después de cada adición, hasta que el colororiginal del reactivo se desaparezca.(Continua)-2-1989-020

NTE INEN 17071990-025.2.1.7 Titulacióna) Se añaden 3 a 4 gotas de azul de metileno y se continúa adicionando la solución desde la buretahasta que el indicador esté completamente decolorado. El líquido hervido retorna a la apariencia deun anaranjado brillante que tenía antes de adicionar el indicador. La lectura de la bureta se tomacomo una aproximación de la titulación.3b) Se efectúa una segunda titulación en la cual se añade de una vez 1 cm menos del consumo totalde la solución muestra utilizada en la primera titulación.c) El líquido se calienta, y después que alcanza el punto de ebullición se pone en funcionamiento elreloj, y el líquido se mantiene en ebullición por dos minutos. Añadir el indicador azul de metileno.d) La titulación se completa añadiendo gota a gota la solución muestra hasta que el indicador seadecolorado. La titulación debe estar completa dentro de tres minutos desde que comienza laebullición y durante este tiempo la mezcla debe mantenerse hirviendo continuamente para eliminar3el aire. Entre dos titulaciones deben tener una diferencia de 0,1 cm .35.2.1.8 Cálculos. La concentración de azúcar invertido, en mg por 10 cm , se obtiene a partir dela Tabla 1 (ver Anexo A). La polarización directa promedio en la melaza es aproximadamente 33,ya que la solución preparada usada para la titulación contiene aproximadamente 0,25 gramos de3sacarosa por 100 cm , e s t e dato indica la columna en la Tabla 1 que debe ser usada. Si después3de la interpolación, la cantidad de azúcar invertida es "a" en mg por cada 100 cm , entonces:AR a x 0,5mSiendo:ARam porcentaje de azúcares reductores en la melaza,3 mg de azúcar invertido por cada 100 cm de disolución, masa original de la melaza, en gramos.5.2.2 Determinación de azúcares totales y de la sacarosa35.2.2.1 Se toman con la pipeta 50 cm de la solución preparada para azúcares reductores en un33matraz volumétrico de 200 cm . Se añaden 30 cm de agua destilada, se mezcla y calienta por 103minutos en un baño de María a 65 C; luego se adiciona 10 cm de ácido clorhídrico (gravedadespecífica 1,103), se mezcla y se deja en reposo durante 30 minutos.5.2.2.2 Se adiciona una gota de fenoltaleína y se agrega la solución de hidróxido de sodio desde una3bureta hasta que la solución se torne débilmente rosada. Aproximadamente se requieren 16,5 cmde hidróxido de sodio. Luego se añade ácido clorhídrico 0,5 M, gota a gota, hasta que el col or delindicador desaparezca.35.2.2.3 Se lleva a volumen con agua destilada (matraz volumétrico de 200 cm ), se tapa y semezcla.5.2.2.4 Se llena la bureta con la solución preparada en el numeral 5.2.2.3.335.2.2.5 Se toman con la pipeta 5 cm de solución Fehling A y 5 cm de solución Fehling B dentrode un matraz Erlenmeyer que contiene perlas de vidrio, trozos de piedra pómez y 5 gotas de parafinalíquida.35.2.2.6 Desde la bureta agregue 15 cm de solución muestra a la solución de Fehling.5.2.2.7 Se calienta la mezcla en la hornilla hasta alcanzar la ebullición en un tiempo máximo de2,25 minutos. Si después de que el líquido ha estado en ebullición durante 10 a 15 segundos, y sucolor muestra que cierta cantidad de reactivo de Fehling no ha sido reducida, se realizan otras3adiciones añadiendo 5 cm , dejando hervir unos pocos segundos después de cada adición, hastaque el color original del reactivo desaparezca.(Continua)-3-1989-020

NTE INEN 17071990-025.2.2.8 Titulación. Se procede de igual forma que para el numeral 5.2.1.7.5.2.2.9 Cálculos. Una vez que toda la sacarosa fue invertida por el ácido clorhídrico, la columna de 0 g de3sacarosa por 100 cm de la Tabla 1 (ver Anexo A) se usa para obtener la cantidad de azúcares3reductores en mg por 100 cm de la solución preparada.Si después de la interpolación se encuentra el valor de "Y" en mg de azúcar invertida por cada 1003cm , entonces:IT YmSiendo:ITYm porcentaje de azúcares totales (como azúcar invertido) en la melaza,3 mg de azúcar invertido por cada 100 cm de disolución, masa original de la melaza, en gramos.S (IT-AR) x 0,95Siendo:S porcentaje de sacarosa en la melazaIT porcentaje de inversión total en la melazaAR porcentaje de azúcares reductores en la melaza5.2.3 Determinación de azúcares totales como reductoresLos niveles de azúcares totales (porcentaje) en la melaza se determinan utilizando la siguientefórmulaAT S ARSiendo:AT porcentaje de azúcares totales expresados como reductores en la melazaS porcentaje de sacarosa según numeral 5.2.2.8.AR porcentaje de azúcares reductores según numeral 5.2.1.86. INFORME DE RESULTADOS6.1 Como resultado final, debe indicarse la media aritmética de las determinaciones realizadas porduplicado de la misma muestra de ensayo.6.2 El reporte del ensayo deberá indicar el método empleado y el resultado obtenido. Deberá,además, mencionarse cualquier condición de operación no especificada en esta norma oconsiderada como opcional, así como cualquier detalle o incidente probable que pudo influenciaren el resultado.6.3 Los resultados deben darse con aproximación hasta la décima.6.4 El reporte del ensayo debe incluir toda la información necesaria para la completa identificaciónde la muestra(Continua)-4-1989-020

NTE INEN 17071990-02ANEXO A3TABLA 1. Miligramos de azúcar reductor requeridos para reducir 10cm de solución de Fehling(Método de Lane Eynon)Soluciónazúcarrequeridaen cm3Mg DE AZUCAR REDUCTOR POR 100 cm3 DE SOLUCIÓN CUANDO LA CONCENTRACIÓN DE AZÚCAREN g/100 cm3 ES:00,511,5*22,5*33,5*44,5*57,5*1017,5* 2868482817977* Calculado por interpolación** Calculado por extrapolación(Continua)-5-1989-020

NTE INEN 17071990-02ANEXO BPREPARACION DE SOLUCIONESB.1 Solución estándar de azúcar invertidoB.1.1 Instrumental3B.1.1.1 Vaso de precipitación, de 250 cm .3B.1.1.2 Matraz volumétrico, de 1 000 cm .B.1.2 Reactivos8.1.2.1 Ácido clorhídrico, (gravedad específica 1,103)8.1.2.2 Solución de hidróxido de sodio (4M).B.1.2.3 Acido benzoico.B.1.3 Procedimiento3B.1.3.1 Disolver 9,500 g de sacarosa (C12 H22011) en 70 cm de agua destilada en el vaso de33precipitación de 250 cm . Añadir 10 cm de ácido clorhídrico (gravedad específica 1,103) y dejara temperatura ambiente por cinco días. Añadir suficiente hidróxido de sodio 4M3(aproximadamente 15 cm ) hasta alcanzar un pH alrededor de 3,0 (usando un medidor de pH) y3transferir al matraz volumétrico de 1 000 cm . Disolver 2 g de ácido benzóico (C6HS.COOH)3en agua destilada (800 cm ) por calentamiento, enfriar y agregar al matraz volumétrico. Enrasar3el matraz volumétrico de 1 000 cm con agua destilada. Esta solución tiene 1 g de azúcar invertido3por 100 cm .B.2 Solución de Fehling "A"B.2.1 Instrumental8.2.1.1 Matraz volumétrico, de 1000 cm3B.2.2 ReactivosB.2.2.1 Sulfato de cobre pentahidratadoB.2.3 ProcedimientoB.2.3.1 Disolver 69,278 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H20) enagua destilada3en el matraz volumétrico, y enrasar a 1 000 cm .B.3 Solución de Fehling "B"B.3.1 Instrumental3B.3.1.1 Matraz volumétrico, de 200 cm .3B.3.1.2 Matraz volumétrico, de 500 cm .3B.3.1.3 Matraz volumétrico, de 1 000 cm .B.3.2 ReactivosB . 3.2.1 Tartrato de sodio y potasio tetrahidratadoB.3.2.2 Hidróxido de sodioB.3.2.3 Papel filtro 613 SyS o su equivalente(Continua)-6-1989-020