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应用简报食品检测使用 Captiva EMR-Lipid 与 �，黄悯嘉本文介绍了一种结合 QuEChERS 和 Captiva EMR-Lipid 进行样品前处理，利用 ��内代谢可产生环氧丙酰胺 ��蛋白和 DNA �此，国际癌症研究机构 (IARC) 于 1994 年将丙烯酰胺列为 2A ��要。《食品安全国家标准 食品中丙烯酰胺的测定》(GB 5009.204-2014) [1] 中规定的方法包括LC-MS/MS 法和 GC-MS 法。其中 LC-MS/MS �易操作；而 GC-MS �用于大批量样品分析。而且，GB/T 5009.204-2014 ��化以去除杂质。本文介绍了一种将 Captiva EMR-Lipid 与 LC-MS/MS �。该方法采用乙腈提取样品，经 Captiva EMR-Lipid �，然后进行 LC-MS/MS 分析。该方法的线性范围为 0.5–10 ng/mL，定量限为 10 ��量均在 10 µg/kg以上。
实验部分试剂和样品2 g 样品，加入标准品（内标），10 mL 水，和陶瓷均质子涡旋 1 min，静置 30 min加入 10 mL 乙腈，涡旋 1 min，加入 Bond Elut QuEChERS丙烯酰胺萃取盐包 ��内标的标准品，纯度均 99.0%，购于 Dr 公司。涡旋或震荡 5 min，9000 r/min 4 低温离心 10 �酰胺内标分别用甲醇配制成取 4 mL 上层清液加入 1 mL 水涡旋混匀后取 3 mL 直接过Captiva EMR 小柱 300 mg100 mg/L �液用甲醇溶液配制成 1 mg/L 的混标工作液。取 1 mL 流出液，40 氮气吹至近干样品为市售食品。1 mL 流动相（0.1% 甲酸水）定容，过 0.2 µm Captiva RC 过滤膜仪器与消耗品Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统与 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统。Agilent Bond Elut QuEChERS � Agilent Captiva EMR-Lipid 小柱 300 mg，3 mL（部件号 5190-1003）。样品前处理称取样品 2 g，加入 10 mL �置 20 分钟；加入 10 mL 乙腈和 Agilent Bond Elut QuEChERS丙烯酰胺萃取盐包，涡旋振荡 5 分钟；然后在 9000 r/min 的转速下于 4 C 低温离心 10 分钟；移取 4 mL 上清液至另一离心管中，再加入 1 mL 水充分混匀，并经过离心后取 3 mL 过 CaptivaEMR-Lipid 300 mg 小柱；取 1 mL 流出液于 40 C 下用氮气吹至近干，用流动相（0.1% 甲酸水）将其定容至 1 mL。经 Agilent0.2 µm Captiva RC 膜过滤后，进行 LC-MS/MS 测定。样品前处理流程图如图 1 所示。2图 1. 奶粉样品前处理流程图色谱条件6470 LC-QQQ 检测色谱柱：Agilent Polaris 3 Amide-C18, 150 3.0 mm进样体积：5 µL柱温：流动相 A：30 C0.1% 甲酸水溶液流动相 B：乙腈梯度：见表 1流速：0.4 mL/min表 1. 液相色谱梯度变化表时间 (min)B%00303.5906.59070100
质谱条件离子源：AJS ESI 干燥气温度：250 M丙烯酰胺极性较强，出峰早，而常规 C18 �多采用 AQ 柱对丙烯酰胺进行分析。本文比较7 L/min了 Agilent Poroshell 120 SB-Aq 2.7 µm 3.0 mm 100 cm 色谱柱和Agilent Polaris 3 Amide-C18 150 3.0 mm 色谱柱。在用 SB-AQ40 psi色谱柱进行分析时，丙烯酰胺在 1 min 左右出峰，极性干扰物对325 C丙烯酰胺会有一定的干扰；选择 Polaris 色谱柱，丙烯酰胺的保留11 L/min时间在 3.0 min 左右，再利用 Masshunter 采集软件流路切换功能4000 ��。丙烯酰胺及内标的 MRM 谱图：见图 2丙烯酰胺及内标的 MRM 参数：见表 2 103.532.521.510.50Captiva EMR-Lipid 的选择评价了单独使用 QuEChERS 以及将 QuEChERS 与 EMR 结合使13C-Acrylamide: ESI MRM Frag 30.0V CID@10.0 (73.0 - 56.0) std �采用 QuEChERS �2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 102.521.510.50333.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9Acrylamide: ESI MRM Frag 30.0V CID@30.0 (72.0 - 44.0) std ��强，基质抑制率达到 47%。将QuEChERS 盐包与 EMR 制率降低为 30%。2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 1032.521.510.5033.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9Acrylamide: ESI MRM Frag 30.0V CID@10.0 (72.0 - 55.0) std 20ppb.d42.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.933.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9图 2. 丙烯酰胺及内标 (10 ng/mL) 的 MRM 谱图表 2. 化合物 MRM 030碰撞能量(eV)103010因 此 ， 本 文 采 用 Q u E C h E R S 丙 烯 酰 胺 萃 取 盐 包 与 C a p t i vaEMR-Lipid 相结合进行样品前处理。 10443.532.521.510.50 1042.221.81.61.41.210.80.60.40.20Agilent Poroshell120 SB-Aq 2.7 µm 3.0 mm 100 cm0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8Agilent Polaris3 Amide-C18 150 3.0 mm0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8响应 vs. 采集时间 (min)图 3. 采用 Agilent Polaris 3 Amide-C18 150 3.0 mm 色谱柱和 Agilent Poroshell120 SB-Aq 2.7 µm 3.0 mm 100 cm �3
表 3. .3%4.5%104.8%3.2%71.6%72.8%40%10 奶粉QuEChERS EMR76.7%20 µg/kg图 4. 3%丙烯酰胺在浓度 2–200 ng/mL 相关系数 0.99。结果见图 576.565.554.543.532.521.510.50-0.586.7%50 µg/kg78.2%78.6%丙烯酰胺 — 7 个浓度，已使用 7个浓度，14 个点，已使用 14 个点，0 QCy 0.917527* x 0.079772R 2 ��：无80.7%表 4. �加标浓度回收率88.3%93.2%10 µg/kg-0.5 10.511.522.5图 5. 丙烯酰胺标准曲线33.544.555.566.577.58 8.5 和精密度实验，添加10 µg/kg、20 µg/kg、50 µg/kg 7%92.5%饼干20 µg/kg99.0%101.6%96.8%90.1%相对标准偏差 (RSD) 小于 3.6% 至 104.8% 之间，RSD 小于 �率在 71.9% 至 80.2% 之间，率在 75.9% 至 98.0% 之间，RSD 小于 5.0%。结果如表 3 至表 594.9%101.5%50 µg/kg106.4%108.0%102.0%108.5%4
表 5. �标浓度回收率平均回收率RSD77.1%10 µg/kg76.5%75.9%3.0%78.3%86.8%88.9%20 µg/kg88.0%96.4%性良好，且灵敏度满足 GB 5009.204-2014 食品中丙烯酰胺定量限 10 μg/kg 一种采用 Captiva EMR-Lipid 与 LC-MS/MS %74.7%结论89.3%3.9%85.0%1. GB 5009.204-2014 食品安全国家标准 食品中丙烯酰胺的测定2. 采用 SampliQ QuEChERS AOAC 试剂盒及 LC/MS/MS ��201196.2%95.3%50 息消耗品部件号实际样品分析Agilent Bond Elut QuEChERS5985-5850Agilent Captiva EMR-Lipid 300 mg，3 如下：Agilent Polaris 3 Amide-C18 150 3.0 mm ��薯片 1薯片 2薯片 3丙烯酰胺平均含量 �均含量 (μg/kg)曲奇饼干 1曲奇饼干 2曲奇饼干 3曲奇饼干 4曲奇饼干 55190-5096246.2薯片 4薯片 5Agilent Captiva RC 15 mm 0.2 µm 099.45
A-China 有变更，恕不另行通知。 安捷伦科技（中国）有限公司，20192019 年 6 月 21 日，中国出版5994-1119ZHCN
Captiva EMR-Lipid 的选择 评价了单独使用 QuEChERS 以及将 与 EMR 结合使 �、蛋白质含量高的淀粉类 食品仅采用 QuEChERS � �基质抑制率达到 47%。将
