Transcription
蛋白质电泳和Western nblot recipes储存液转印缓冲液Stocksolutions 7.6 1 M Tris-HCl，pH 1 M Tris-HCl, pH 7.6 0.5 M Tris-HCl，pH 6.8 0.5 M Tris-HCl, pH 6.8 10% SDSTransfer 25X Tris-buffer甘氨酸转印缓冲液 25X Tris-glycine transfer buffer 20X Bis-Tris 转印缓冲液 20X Bis-Tris transfer buffer 10% SDS 1.0% 溴酚蓝 缓冲液Wash buffers 含Tris-bufferedwithTween 20 surfactant (TBST)Tween 20saline的 Tris缓冲液（TBST） 10X 磷酸盐缓冲液（PBS）Tris-buffered saline (TBS)Tween 20 的磷酸盐缓冲液（PBST） 含Phosphate-bufferedsaline with Tween 20 surfactant (PBST) 10X phosphate-buffered saline (PBS)样品制备缓冲液Sample preparation buffers RIPA 裂解液buffer缓冲液） 2X2X SDSSDS 上样缓冲液（Laemmlisample buffer (Laemmlibuffer) 4X LDS 上样缓冲液 4X LDS sample bufferElectrophoresis running buffers 电泳缓冲液10X Tris-glycine SDS running buffer甘氨酸 nativeSDS 电泳缓冲液 10X10X TrisTris-glycinerunning buffer 10X Tris- 甘氨酸非变性电泳缓冲液 20X MOPS SDS running buffer 20X MOPS SDS 电泳缓冲液 20X MES SDS running buffer 20X MES SDS 电泳缓冲液 10X tricine SDS running buffer 10X tricine SDS 电泳缓冲液Blocking and stripping buffers封闭液和抗体剥离液 5% nonfat milk 5% 脱脂牛奶 3% BSA 3% BSA Stripping buffer 抗体剥离液Gel casting recipes Invitrogen SureCast reagents手灌胶配方 Stand-alone reagents Invitrogen SureCast 试剂 自选配胶试剂
储存液样品制备缓冲液1 M Tris-HCl，pH 7.6Tris base12.11 gRIPA 裂 解 液：25 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、1% NP40、1% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS （100 mL），pH 7.6去离子水80 mLNaCl0.88 gNP-401g脱氧胆酸钠1g10% SDS1 mL用 HCl 调节 pH 值至 7.6去离子水至 100 mL0.5 M Tris-HCl，pH 6.81 M Tris-HCl，pH 7.62.5 mLTris base6.06 g去离子水至 100 mL去离子水60 mLThermo Scientific Pierce 蛋白酶抑制剂片剂（货号 A32965）2片用 HCl 调节 pH 值至 6.8去离子水至 100 mL10% SDSSDS去离子水1.00 g至 10 mL即用型推荐产品：Thermo Scientific RIPA 裂解液（货号 89900）1.0% 溴酚蓝溴酚蓝100 mg去离子水至 10 mL10X Tris 缓冲液（TBS）SDS 上样缓冲液（Laemmli 缓冲液）：63 mM Tris-HCl、10% 甘油、2% SDS、0.0025% 溴酚蓝，pH 6.82X 储存液的配方：Tris base24 gNaCl88 g0.5 M Tris-HCl，pH 6.82.5 mL去离子水900 mL甘油2 mL10%（w/v）SDS4 mL至 1,000 mL0.1%（w/v）溴酚蓝0.5 mL去离子水至 10 mL用 HCl 调节 pH 值至 7.6去离子水10X 磷酸盐缓冲液（PBS）该缓冲液可在 4 C 下稳定保存 6 个月。NaCl80 gKCl2gNa2HPO414.4 gNaH2PO42.4 g去离子水900 mL用 NaOH 调节 pH 值至 7.0去离子水至 1,000 mL即用型推荐产品：Thermo Scientific Pierce 20X TBS 缓冲液（货号 28358）Thermo Scientific Pierce 20X PBS 缓冲液（货号 28348）即用型推荐产品：Invitrogen Novex Tris- 甘氨酸 SDS 上样缓冲液（2X）（货号 LC2676）
样品制备缓冲液电泳缓冲液LDS 上样缓冲液：106 mM Tris-HCl、141 mM Tris base、2%LDS、10% 甘油、0.51 mM EDTA、0.22 mM SERVA BlueG250、0.175 mM 酚红，pH 8.5Tris- 甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：25 mM Tris base、192 mM甘氨酸、0.1% SDS，pH 8.34X 储存液的配方：Tris HCl0.666 gTris base0.682 gLDS0.800 gEDTA0.006 g甘油4gSERVA Blue G250（1% 溶液）0.75 mL酚红（1% 溶液）0.25 mL去离子水至 10 mL10X 储存液的配方：Tris base29 g甘氨酸144 gSDS10 g去离子水至 1,000 mL即用型推荐产品：Invitrogen Novex Tris- 甘氨酸 SDS 电泳缓冲液（10X）（货号 LC2675）该缓冲液可在 4 C 下稳定保存 6 个月。切勿使用酸或碱调整 pH 值。即用型推荐产品：Invitrogen NuPAGE LDS 上样缓冲液（4X）（货号NP0007）Tris- 甘 氨 酸 非 变 性 电 泳 缓 冲 液：25 mM Tris base、192mM 甘氨酸，pH 8.310X 储存液的配方：Tris base29 g甘氨酸144 g去离子水至 1,000 mL即用型推荐产品：Invitrogen Novex Tris- � LC2672）MOPS SDS 电 泳 缓 冲 液：50 mM MOPS、50 mM Trisbase、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.720X 储存液的配方：MOPS104.6 gTris base60.6 gSDS10 gEDTA3.0 g去离子水至 500 mL即用型推荐产品：Invitrogen MOPS SDS 电泳缓冲液（20X）（货号NP0001）
电泳缓冲液转印缓冲液MES SDS 电泳缓冲液：50 mM MES、50 mM Tris base、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.3Tris- 甘氨酸转印缓冲液：12 mM Tris base、96 mM 甘氨酸，pH 8.320X 储存液的配方：25X 储存液的配方：MES97.6 gTris base18.2 gTris base60.6 g甘氨酸90 gSDS10 g去离子水至 500 mLEDTA3.0 g去离子水至 500 mL切勿使用酸或碱调节 pH 值。即用型推荐产品：Invitrogen Novex Tris- 甘氨酸转印缓冲液（25X）（货号 LC3675）即用型推荐产品：Invitrogen MES SDS 电泳缓冲液（20X）（货号NP0002）Tricine SDS 电 泳 缓 冲 液：100 mM Tris base、100 mMtricine、0.1% SDS，pH 8.310X 储存液的配方：Bis-Tris 转印缓冲液：25 mM bicine、25 mM Bis-Tris（游离碱）、1 mM EDTA，pH 7.220X 储存液的配方：Bicine10.2 gBis-Tris（游离碱）13.1 gEDTA0.75 g至 125 mLTris base121 g去离子水Tricine179 g该缓冲液可在 4 C 下稳定保存 6 个月。切勿使用酸或碱调整 pH 值。SDS10 g去离子水至 1,000 mL该缓冲液可在室温下稳定保存 6 个月。切勿使用酸或碱调节 pH 值。即用型推荐产品：Invitrogen NuPAGE �推荐产品：Invitrogen Novex Tricine SDS 电泳缓冲液（10X）（货号 LC1675）
漂洗缓冲液封闭液和抗体剥离液含 Tween 20 去垢剂的 Tris 缓冲液（TBST）5% 脱脂牛奶10X TBS100 mL脱脂奶粉2.5 gTween 20 去垢剂1 mLTBST 或 PBST至 50 mL去离子水至 1,000 品：即用型推荐产品：Thermo Scientific Pierce 20X TBS Tween 20 缓冲液（货号 28360）Thermo Scientific Pierce 澄清牛奶封闭液 10X（货号 37587）含 Tween 20 去垢剂的磷酸盐缓冲液（PBST）3% BSA10X PBS100 mLBSA1.5 gTween 20 去垢剂1 mLTBST 或 PBST至 50 mL去离子水至 1,000 品：Thermo Scientific Pierce 20X PBS Tween 20 缓冲液（货号 28352）即用型推荐产品：Thermo Scientific Pierce Blocker BSA（10X），TBS 体系（货号 37520）Thermo Scientific Pierce Blocker BSA（10X），PBS 体系（货号 37525）抗体剥离液0.5 M Tris-HCl，pH 6.812.5 mL10% SDS20 mL2- 巯基乙醇0.8 mL去离子水67.5 mL即用型推荐产品：Thermo Scientific Restore 抗体剥离液（货号21059）Thermo Scientific Restore 荧光抗体剥离液（货号62300）
手灌胶配方使用 SureCast 度4%分离胶溶液6%8%10%12%14%16%18%20%SureCast 40% 丙烯酰胺（货号 HC2040） 0.8 mL 1.2 mL 1.6 mL 2.0 mL 2.4 mL 2.8 mL 3.2 mL 3.6 mL 4.0 mLSureCast 分离胶缓冲液（货号 HC2215） 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL蒸馏水5.1 mL 4.7 mL 4.3 mL 3.9 mL 3.5 mL 3.1 mL 2.7 mL 2.3 mL 1.9 mL10% SureCast APS（货号 HC2005）80 µL80 µL80 µL80 µL80 µL80 µL80 µL80 µL80 µLSureCast TEMED*（货号 HC2006）8 µL8 µL8 µL8 µL8 µL8 µL8 µL8 µL8 µL* �需要脱气。4%浓缩胶SureCast 丙烯酰胺（40%）（货号 HC2040） 0.30 mLSureCast 浓缩胶缓冲液（货号 HC2112）0.75 mL蒸馏水1.92 mL10% SureCast APS（货号 HC2005）30 µLSureCast TEMED*（货号 HC2006）3 µL* ��储存液。所有溶液均可室温储存。50% 丙烯酰胺 /Bis（29:1） 48.3 g 丙烯酰胺 1.7 g Bis加水定容至 100 月分离胶缓冲液（1 M Tris-HCl，pH 8.8） 将 30.3 g Tris 加入 150 mL 水中 用 HCl 调节 pH 值至 8.8加水定容至 250 mL催化剂：过硫酸铵（APS）（使用当天 10% SDS新鲜配制） 10.0 g SDS 100 mg 过硫酸铵加水定容至 100 mL加水定容至 2 mL浓缩胶缓冲液（0.375M Tris HCl，pH 6.8） 将 11.4 g Tris 加入 150 mL 水中 用 HCl 调节 pH 值至 6.8加水定容至 250 mL50% 蔗糖 50.0 g 蔗糖加水定容至 100 mL
分离胶下表每列所示体积可制备约 25 mL 分离胶，足以用于灌制四块 1.0 mm %凝胶50% 丙烯酰胺 /Bis3.0 mL4.0 mL5.0 mL6.0 mL7.0 mL8.0 mL9.0 mL10.0 mL分离胶缓冲液9.4 mL9.4 mL9.4 mL9.4 mL9.4 mL9.4 mL9.4 mL9.4 mL10% SDS250 µL250 µL250 µL250 µL250 µL250 µL250 µL250 µL50% 蔗糖 *4.0 mL4.0 mL4.0 mL4.0 mL4.0 mL4.0 mL4.0 mL4.0 mL水7.8 mL6.8 mL5.8 mL4.8 mL3.7 mL2.7 mL1.7 mL750 µLTEMED**6.25 µL6.25 µL6.25 µL6.25 µL6.25 µL6.25 µL6.25 µL6.25 µLAPS**625 µL625 µL625 µL625 µL625 µL625 µL625 µL625 µL* 溶液体积（基于上表数据增加 4.0mL 水量）。** �缩胶以下配方可制备 12.5 mL 的 4% 浓缩胶。溶液4%50% 丙烯酰胺 /Bis1.0 mL浓缩胶缓冲液4.2 mL10% SDS125 µL水6.3 mLTEMED**5.0 µLAPS**1.0 mL** ��高品质蛋白质免疫印迹结果Invitrogen BlotBuilder mofisher.com/westerneducation
赛默飞世尔科技上 ��邮编 201206电话 021-68654588*2570北 易中心C座7层/8层邮编 100000电话 010-87946888广 ��星辉广场北塔204-206 单元邮编 510000电话 020-82401600沈 阳西 9 室邮编 大厦1006-08单元电话 024-31096388*3901邮编 �宁区仙霞路99号21-22楼邮编 200051电话 021- 61453628 ／ 021-61453637成 都成都市临江西路1号锦江国际大厦1406 室邮编 610041电话 028-65545388*5300电话 029-84500588*3801南 �1103室邮编 210000电话 021-68654588*2901武 �生物园路生物医药园C8栋5楼邮编 430075电话 二维码关注我们的微信公众账号昆 ��场写字楼908单元邮编 650021电话 ��For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures. 2019 Thermo Fisher Scientific Inc. All rightsreserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified.COL32290 0418 2020 Thermo Fisher Scientific ��均为Thermo Fisher Scientific及其子公司所有。
10X tricine SDS running buffer Transfer buffer 25X Tris-glycine transfer buffer 20X Bis-Tris transfer buffer Wash buffers Tris-buffered saline with Tween 20 surfactant (TBST) Phosphate-buffered saline with Tween 20 surfactant (PBST) Blocking and stripping buffers 5% nonfat milk 3% BSA Stripping buffer Gel .
